三葉青多糖具有獨(dú)特的藥理活性，三葉青的功效與作用在臨床應(yīng)用中具有很大潛力。但由于多糖的結(jié)構(gòu)復(fù)雜,導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)測(cè)定及合成具有一定的難度和特殊性。同時(shí)其在天然產(chǎn)物中含量較低而不易被分離,為多糖研究和臨床應(yīng)用帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

一、多糖的分離

  三葉青中多糖的提取方法主要有回流法、沸水法、稀酸法、超聲法、稀堿法I和稀堿法Ⅱ。其中稀堿法I和稀堿法Ⅱ的多糖提取效率高于其他提取方法。而067稀堿法Ⅰ略高于稀堿法Ⅱ,通過(guò)條件優(yōu)化,確定提取溫度為70℃、提取時(shí)間為1.5h、液料比為35:1、提取次數(shù)為2次建立最佳的稀堿法I三葉青多糖提取條件。而在后續(xù)的多糖純化條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中選定,靜置時(shí)間為5h,7000min為最佳轉(zhuǎn)速,5min為最佳離心時(shí)間建立三葉青多糖的純化方法。由于堿性條件會(huì)破壞蛋白質(zhì)與多糖的共價(jià)結(jié)合,釋放更多的多糖類物質(zhì),因此多糖類物質(zhì)的提取效率在堿性條件下與pH成正比。但在實(shí)際的提取分離中,考慮到其他成分的協(xié)同提取,在不適合采用稀堿法的情況下,回流法是比較理想的選擇。另外俞盈等申請(qǐng)了三葉青藤多糖提取物及其制備方法和應(yīng)用的發(fā)明專利,為三葉青多糖成分的生物活性研究提供了方法支撐。

二、多糖的測(cè)定

  由于多糖的結(jié)果復(fù)雜,其多糖含量的測(cè)定存在一定難度,目前多采用葡萄糖+3,5-二硝基水楊酸液和水+3,5-二硝基水楊酸液作為測(cè)定基質(zhì)溶液。在優(yōu)化波長(zhǎng)范圍時(shí)發(fā)現(xiàn)在400~480mm以上兩溶液的吸光值不穩(wěn)定,而在580~600mm葡萄糖+3,5-二硝基水楊酸液的吸光值接近于0,因此將測(cè)定的波長(zhǎng)范圍擬定在480~570m。經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化,確定水浴加熱時(shí)間5min加熱溫度90℃、靜置時(shí)間20min、3,5-二硝基水楊酸的用量7mL為三葉青多糖的最佳測(cè)定實(shí)驗(yàn)條件。

 目前的三葉青化學(xué)成分測(cè)定主要依賴于傳統(tǒng)的理化鑒定手段,主要依據(jù)一類指標(biāo)成分的化學(xué)特征,如特定的顯色反應(yīng),隨著高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)等色譜技術(shù)的發(fā)展和色譜-光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)的出現(xiàn),可以精確反映中藥材的化學(xué)組分,迅速地成為中藥鑒定和質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)的有效手段?；瘜W(xué)鑒定方法的另一大類是光譜分析技術(shù),該技術(shù)以紅外光譜、紫外光譜、ⅹ-衍射光譜、拉曼光譜、熒光光譜等技術(shù)為代表,在混合組分的特征分析上具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。范世明等還提供了一種檢測(cè)三葉青葉中多種化學(xué)成分的方法與流程,為三葉青葉的開發(fā)利用和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

野生三葉青價(jià)格多少錢一斤？

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